富澤 稔¹, 篠崎 文信², 杉山 隆夫³, 山本 重則⁴, 末石 眞³, 吉田 孝宣⁵

Minoru TOMIZAWA¹, Fuminobu SHINOZAKI², Takao SUGIYAMA³, Shigenori YAMAMOTO⁴, Makoto SUEISHI³, Takanobu YOSHIDA⁵

¹独立行政法人国立病院機構　下志津病院消化器内科, ²独立行政法人国立病院機構　下志津病院放射線科, ³独立行政法人国立病院機構　下志津病院リウマチ科, ⁴独立行政法人国立病院機構　下志津病院小児科, ⁵独立行政法人国立病院機構　下志津病院内科

¹Department of Gastroenterology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ²Department of Radiology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ³Department of Rheumatology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁴Department of Pediatrics, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁵Department of Internal Medicine, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital

キーワード :

【目的】
超音波診断装置はリアルタイムに照射野を確認することができる．Frizzled（Fz）-9は細胞の分化と増殖に関与するWnt pathwayのレセプターで,siRNAにて発現を抑制すると培養細胞の増殖が抑制されることが判明している（Fujimoto et al. Int J Onocl 35, 861, 2009）．そこで今回我々は超音波診断装置を用いてFz9のsiRNAを培養細胞への導入を試みた．
【方法】
Hep3B（肝癌細胞株）に蛍光標識したdouble strand RNA（F-dsRNA）をLipofectamine 2000（Lipo）またはSSA-700A （東芝）による超音波照射（5分間）を用いて導入48時間後蛍光顕微鏡にて観察した．照射には8MHzリニアプローブを用い,mechanical index（MI）は装置の設定に従い0.4または0.8とした．Fz9に対するsiRNA（siRNA-Fz9）を導入48時間後にタンパク質を抽出し,抗Fz9抗体を用いてウェスタンブロット法,72時間後にMTSアッセイを行った．統計解析にTwo group t-test: unpairedを用いた．
【結果】
F-dsRNAの蛍光はUSではLipoに比して弱いものの,検出された．siRNA-Fz9を導入するとFz9の発現はLipoでは20nM,200nMともに低下した．超音波を照射するとMI=0.4では200nM,MI=0.8では20nM,200nMともにFz9の発現は低下した．細胞増殖は200nMではmockに比してLipoでは32.8 ± 13.6 ％（P＜0.0001）,MI=0.4では36.9 ± 15.1 ％ （P=0.039）,MI=0.8では49.2 ± 12.0 ％ （P=0.041）であった．遺伝子を導入しない群ではLipo,MI=0.4,MI=0.8ともにMTSアッセイで変化はなかった．
【結論】
超音波診断装置を用いてsiRNAが培養細胞に導入され,機能することが判明した．超音波診断装置は日常診療に使用されている．超音波診断装置を用いると目的とする部位に安全に遺伝子を導入できる可能性が示唆された．