富澤 稔¹, 篠崎 文信², 杉山 隆夫³, 山本 重則⁴, 末石 眞³, 吉田 孝宣⁵

Minoru TOMIZAWA¹, Fuminobu SHINOZAKI², Takao SUGIYAMA³, Shigenori YAMAMOTO⁴, Makoto SUEISHI³, Takanobu YOSHIDA⁵

¹独立行政法人国立病院機構　下志津病院消化器内科, ²独立行政法人国立病院機構　下志津病院放射線科, ³独立行政法人国立病院機構　下志津病院リウマチ科, ⁴独立行政法人国立病院機構　下志津病院小児科, ⁵独立行政法人国立病院機構　下志津病院内科

¹Department of Gastroenterology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ²Department of Radiology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ³Department of Rheumatology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁴Department of Pediatrics, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁵Department of Internal Medicine, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital

キーワード :

【目的】
培養細胞に超音波を照射すると遺伝子が導入される（sonoporation）．Sonoporationに用いる照射装置は照射野をモニターすることができず，目的以外の領域に照射する可能性があり，遺伝子治療に用いるには不適切である．超音波診断装置はリアルタイムに照射野を確認することが可能なので目的の領域に遺伝子を導入するgene delivery systemとして適している．そこで超音波診断装置を用いて培養細胞に遺伝子を導入し，機能する可能性を探った．
【方法】
Hep3B （肝癌細胞株）にpEGFP-N1または蛍光標識したdouble strand RNA（F-dsRNA）をLipofectamine 2000（Lipo）またはSSA-700A （東芝）による超音波照射（5分間）（US）を用いて導入48時間後蛍光顕微鏡にて観察した．pGL3 controlをLipoたまはUSにて導入48時間後luciferase assayを行った．pGL3 controlをLipoにて導入3時間後にLuciferaseに対するsiRNAをLipoまたはUSにて導入後48時間後luciferase assayを行った．統計解析にTwo group t-test: unpairedを用いた．
【成績】
GFP，F-dsRNAの蛍光はUSではLipoに比して弱いものの，検出された．USを用いて pGL3 controlを導入するとluciferase活性はLipoに比して32±9.8%　（P＜0.05）であった．pGL3 controlを導入3時間後にLuciferaseのsiRNA（200nM）をUS，Lipoをそれぞれ用いて導入するとmockに比して19.2±2.1% （P＜0.05），57.9±17.0%であった．
【考案】
超音波診断装置を用いてもplasmid，siRNAともに培養細胞に導入され，機能することが判明した．
【結語】
遺伝子導入における超音波診断装置の有用性が明らかになった．