富澤 稔¹, 篠崎 文信², 本吉 慶史³, 杉山 隆夫⁴, 山本 重則⁵, 石毛 尚起⁶, 吉田 孝宣⁷

Minoru TOMIZAWA¹, Fuminobu SHINOZAKI², Yasufumi MOTOYOSHI³, Takao SUGIYAMA⁴, Shigenori YAMAMOTO⁵, Naoki ISHIGE⁶, Takanobu YOSHIDA⁷

¹独立行政法人国立病院機構下志津病院消化器内科, ²独立行政法人国立病院機構下志津病院放射線科, ³独立行政法人国立病院機構下志津病院神経内科, ⁴独立行政法人国立病院機構下志津病院リウマチ科, ⁵独立行政法人国立病院機構下志津病院小児科, ⁶独立行政法人国立病院機構下志津病院脳神経外科, ⁷独立行政法人国立病院機構下志津病院内科

¹Department of Gastrotenterology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ²Department of Radiology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ³Department of Neurology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁴Department of Rheumatology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁵Department of Pediatrics, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁶Department of Neurosurgery, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁷Department of Internal Medicine, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital

キーワード :

【目的】
超音波内視鏡（EUS）は胃癌の進展範囲と深達度の診断に優れている．Frizzled-2はWnt pathwayのレセプターである．Frizzled-2のshort hairpin（shRNA-Fz2）を導入すると胃癌細胞株（MKN45，MKN74）の増殖は抑制される．ソナゾイド^®は造影超音波検査の日常診療に用いられている．そこで今回我々は，ソナゾイド^®がEUSによるshRNA-Fz2の胃癌細胞株への導入が増強され，細胞増殖が抑制される可能性を検討した．統計解析にはone-way analysis of varianceを用いた．
【方法】
底が厚さ190μmのpolystyrene filmの96孔プレート（Greiner Bio-One）の底にEUS（GF-UCT260，オリンパス）の先端にバルーンを装着して水を入れて密着させ，12MHz，1分間超音波を照射した．1孔あたり0.05Mヨウ化カリウム+5mg/mlデンプン溶液にソナゾイド^®を0，1，3，10，30％混合した100μlを入れたのちマイクロプレートにて490nmの吸光度を測定した．胃癌細胞株（MKN45，MKN74，理研細胞バンク）を1孔あたり1000個播きpMetLuc2-control（Promega）100ngをOpti-MEM（Life Technologies）50μlに溶解した．ソナゾイド^®を0，1，3，10，30％混合した．EUSにて照射48時間後ルシフェラーゼ・アッセイを行った．ShRNA-Fz2を1孔あたり100ng添加しEUSにて照射72時間後MTSアッセイにて細胞増殖を解析した．
【結果】
ヨウ素デンプン反応ではソナゾイド^®30％では0％に比して吸光度が18×10-3，5.5×10-3と有意に増加した（P＜0.05）．ルシフェラーゼ・アッセイでは，MKN45ではソナゾイド^®30％は0％に比して8.5×103，5.9×103と有意に増強した（P＜0.05）．MKN74でもソナゾイド^®30％は0％に比して4.8×103，5.4×103と有意に増強した（P＜0.05）．ShRNA-Fz2を導入するとMKN45，MKN74ではソナゾイド^®30％は0％に比してそれぞれ75.8％（P＜0.05），53.9％（P＜0.05）と有意に細胞増殖が抑制された．
【結論】
ソナゾイド^®が存在するとEUS照射にてフリーラジカルが生じ，sonoporationが生じることが示された．胃癌細胞株にEUSにてプラスミドが導入されることが示された．細胞増殖を抑制するプラスミドがソナゾイド^®の存在下にEUSにて胃癌細胞株に導入されて細胞増殖が抑制されたことは，将来的にはEUSを用いた胃癌に対する遺伝子治療の可能性が示唆された．