Online Journal
電子ジャーナル
IF値: 1.878(2021年)→1.8(2022年)

英文誌(2004-)

Journal of Medical Ultrasonics

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2014 - Vol.41

Vol.41 No.Supplement

一般口演 基礎
治療応用

(S488)

超音波内視鏡を用いた培養細胞への遺伝子導入の試み

Sonoporation into cultured cells with endoscopic ultrasonography

富澤 稔1, 篠崎 文信2, 本吉 慶史3, 杉山 隆夫4, 山本 重則5, 末石 眞4, 吉田 孝宣6

Minoru TOMIZAWA1, Fuminobu SHINOZAKI2, Yasufumi MOTOYOSHI3, Takao SUGIYAMA4, Shigenori YAMAMOTO5, Makoto SUEISHI4, Takanobu YOSHIDA6

1独立行政法人国立病院機構下志津病院消化器内科, 2独立行政法人国立病院機構下志津病院放射線科, 3独立行政法人国立病院機構下志津病院神経内科, 4独立行政法人国立病院機構下志津病院リウマチ科, 5独立行政法人国立病院機構下志津病院小児科, 6独立行政法人国立病院機構下志津病院内科

1Department of Gastroenterology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, 2Department of Radiology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, 3Department of Neurology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, 4Department of Rheumatology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, 5Department of Pediatrics, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, 6Department of Internal Medicine, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital

キーワード :

【目的】
超音波診断装置は培養細胞,組織にリアルタイムに照射野を確認しつつ遺伝子を導入することができる.超音波内視鏡は胃癌の進展範囲と深達度の診断に優れている.超音波内視鏡を用いて遺伝子を導入することができれば消化管の腫瘍に対する遺伝子治療の開発が期待される.そこで今回我々は日常診療に用いている超音波内視鏡を用いて培養細胞への遺伝子導入の可能性を探った.
【方法】
ヒト胃癌細胞株MKN45,MKN74(理研細胞バンク)を24孔プレートに培養した.照射時の培地にはOpti-MEM(Life Technologies)を用いた.照射後10%仔牛血清を添加したRPMI1640(Sigma)にて培養した.pGL3 control(Pormega)をLipofectamine LTX(Life Technologies)(LTX)を用いたtransfection,または超音波照射,で導入した.pGL3 controlを添加したがLTXを使用せず,超音波照射もしない群を対照とした.pGL3controlは1孔あたり0.46μg用いた.48時間後luciferase assay(Promega)を行った.超音波の照射は超音波内視鏡診断装置GF-UCT260(Olympus)を用いた.先端のバルーンを水にて膨らませ,プレートの下に密着させて固定し連続1分,または3分照射した.室温は極細形測温抵抗体(Chino)を温度計に装着して測定した.pHは微小量用pH電極(Hanna Instruments)をpH計に装着して測定した.両者ともセンサーを培地に水没させて計測した.
【結果】
LTX,1分照射,3分照射群,対照でlight unitで検討した.MKN45では11000000±160000,2700±950,4070±1200,2000±300であった.MKN74では25000000±150000,25000±11000, 44000±15000,14000±1000であった.温度は最長3分照射中室温と同じであった.培地のpHは,超音波照射群と非照射群では差がみられなかった.
【考察】
超音波内視鏡を用いると培養細胞に遺伝子の導入が可能なことが明らかになった.プローブを密着させる照射法は,胃癌等に応用することが可能なことが期待される.Transfectionの試薬に比して遺伝子の導入高率が悪いことが判明した.今後遺伝子導入高率の改善を図る必要があると考えられた.
【結論】
超音波内視鏡を用いた培養細胞への遺伝子導入は可能であった.