富澤 稔¹, 篠崎 文信², 杉山 隆夫³, 山本 重則⁴, 末石 眞³, 吉田 孝宣⁵

Minoru TOMIZAWA¹, Fuminobu SHINOZAKI², Takao SUGIYAMA³, Shigenori YAMAMOTO⁴, Makoto SUEISHI³, Takanobu YOSHIDA⁵

¹独立行政法人国立病院機構下志津病院消化器内科, ²独立行政法人国立病院機構下志津病院放射線科, ³独立行政法人国立病院機構下志津病院リウマチ科, ⁴独立行政法人国立病院機構下志津病院小児科, ⁵独立行政法人国立病院機構下志津病院内科

¹Department of Gastroenterology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ²Department of Radiology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ³Department of Rheumatology, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁴Department of Pediatrics, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital, ⁵Department of Internal Medicine, National Hospital Organization Shimoshizu Hospital

キーワード :

【目的】
超音波を用いた遺伝子導入は効率が悪い．plasmidを制限酵素で切断するとstable transfectionの効率が改善する（Stuchbury et al., Cytotechnology 2010）．そこで今回我々はreporter plasmidを制限酵素で切断し超音波診断装置を用いて培養細胞への導入を試みた．
【方法】
肝細胞癌細胞株（PLC/PRF/5），膵癌細胞株（PANC1）を24孔プレートに培養した．pGL3 control （Pormega）をBamH1で切断し，1.2％アガロースゲルで断片を分離しGel Extraction kit （Qiagen）で回収した．プラスミドはLipofectamine LTX （Life Technologies）を用いたtransfection，または超音波照射，で導入した．48時間後luciferase assay（Promega）を行った．制限酵素による切断の有無（uncut or cut）でrelative light unit（RLU）で比較検討した．超音波の照射は超音波診断装置（東芝SSA-700A）を用いてリニアプローブ（8.0MHz）にて24孔プレートの底を5分間移動しつつ照射した．
【結果】
PLCではtransfection群でuncut=1.5×106±1.7×105（average±standard deviation），cut=1.6×105±1.5×104であった．超音波照射群ではuncut=9.7×102±9.7×10，cut=1.0×102±53であった．PANC1ではtransfection群でuncut=9.8×105±2.8×104，cut=3.1×103±5.3×102であった．超音波照射群ではuncut=1.1×104±9.0×103，cut=56±4.1であった．plasmidを添加したがtransfection，超音波照射ともに行わない群ではuncut=32±8.3，cut=33±6.5であった．
【考察】
超音波照射群では対照と比較するとplasmidは培養細胞に導入されたがtransfection群と比較すると効率は低い．Transfection，超音波照射群ともにcutはuncutに比して効率が低い．原因としてplasmidの切断部位によってplasmidの発現効率が異なる可能性がある（von Groll et al., Biotechnol Prog 2006）．今後はmechanical index等の超音波照射に関するパラメーター，plasmidの切断部位，等を検討することが必要と考えられた．